結(jié)直腸癌（CRC）是高發(fā)惡性腫瘤，微衛(wèi)星穩(wěn)定型（MSS）CRC 占比超85%，對PD-1/PD-L1免疫檢查點(diǎn)抑制劑原發(fā)耐藥，核心原因是腫瘤微環(huán)境（TME）呈“冷腫瘤"特征——CD8?效應(yīng)T細(xì)胞浸潤不足，髓系來源抑制細(xì)胞（MDSCs）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）等免疫抑制細(xì)胞大量富集，形成免疫抑制屏障。

m?A甲基化是真核生物mRNA普遍的表觀轉(zhuǎn)錄修飾，YTHDF1作為關(guān)鍵m?A閱讀蛋白，可結(jié)合m?A修飾位點(diǎn)調(diào)控靶mRNA翻譯，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，但YTHDF1在CRC免疫微環(huán)境重塑及MSS型CRC免疫治療耐藥中的具體機(jī)制尚未明確。本研究圍繞YTHDF1展開，旨在揭示其調(diào)控CRC免疫抑制的分子軸，并探索靶向YTHDF1聯(lián)合免疫治療的轉(zhuǎn)化潛力。

這是香港中文大學(xué)于君團(tuán)隊(duì)發(fā)表在Gut（2023）的研究，核心結(jié)論：靶向m?A閱讀器YTHDF1可重塑結(jié)直腸癌（CRC）免疫微環(huán)境、增強(qiáng)CD8?T細(xì)胞殺傷、并與抗PD-1協(xié)同顯著提升療效，尤其可克服MSS型CRC的抗PD-1耐藥。

研究結(jié)果

（一）臨床相關(guān)性：YTHDF1是CRC免疫抑制標(biāo)志物，高表達(dá)提示不良預(yù)后

1. 表達(dá)特征：TCGA、GEO公共數(shù)據(jù)集及408例CRC組織芯片（TMA）驗(yàn)證，YTHDF1在CRC組織中顯著高表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤分期、分級正相關(guān)。

2. 預(yù)后價(jià)值：YTHDF1高表達(dá)組患者總生存期（OS）、無病生存期（DFS）顯著縮短，是CRC獨(dú)立不良預(yù)后因素。

3. 免疫關(guān)聯(lián)：TCGA免疫浸潤分析顯示，YTHDF1高表達(dá)與CD8?T細(xì)胞、IFN-γ、GZMB等效應(yīng)T細(xì)胞特征負(fù)相關(guān)，與MDSCs、Treg等免疫抑制細(xì)胞特征正相關(guān)，證實(shí)YTHDF1是CRC“冷腫瘤"的標(biāo)志性分子。

（二）功能驗(yàn)證：YTHDF1調(diào)控CRC生長與抗腫瘤免疫

1. 敲除抑制腫瘤，激活抗腫瘤免疫：

① 在MSS型CT26、MSI-H型MC38 CRC小鼠模型中，shYTHDF1敲除顯著抑制腫瘤生長、延長小鼠生存期。

② 機(jī)制上，YTHDF1敲除后腫瘤內(nèi)CD8?T細(xì)胞、IFN-γ?CD8?T、GZMB?CD8?T細(xì)胞浸潤顯著增加，MDSCs、Treg細(xì)胞顯著減少；IFN-γ、GZMB、TNF-α等抗腫瘤細(xì)胞因子mRNA水平升高。

③ CD8?T細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)證實(shí)，YTHDF1敲除的抑瘤作用依賴CD8?效應(yīng)T細(xì)胞。

2. 敲入加速腫瘤發(fā)生，構(gòu)建免疫抑制微環(huán)境：

① 構(gòu)建腸上皮特異性Ythdf1敲入（Ythdf1KI）小鼠，聯(lián)合AOM-DSS誘導(dǎo)CRC，結(jié)果顯示Ythdf1KI組腫瘤數(shù)量、大小顯著增加，CRC發(fā)生進(jìn)程顯著加速。

② Ythdf1KI腫瘤中CD8?T細(xì)胞浸潤減少，MDSCs、Treg細(xì)胞增加，IFN-γ、GZMB表達(dá)降低；同時(shí)p65、CXCL1蛋白水平顯著升高，提示YTHDF1通過調(diào)控NF-κB/CXCL1軸參與免疫抑制。

（三）分子機(jī)制：YTHDF1通過m?A-p65-CXCL1軸募集MDSCs，抑制CD8?T細(xì)胞

1. 核心調(diào)控軸：YTHDF1→m?A→p65翻譯→NF-κB激活→CXCL1上調(diào)：

① MeRIP-seq+Ribo-seq聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)，YTHDF1敲除后p65（RELA）mRNA的m?A修飾水平下降，翻譯效率（TE）顯著降低，mRNA水平無明顯變化。

② RIP-qPCR證實(shí)YTHDF1直接結(jié)合p65 mRNA；雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)+點(diǎn)突變驗(yàn)證，p65 mRNA 3'UTR的m?A位點(diǎn)是YTHDF1調(diào)控其翻譯的關(guān)鍵。

③ 功能實(shí)驗(yàn)顯示，YTHDF1敲除導(dǎo)致p65蛋白水平下降，過表達(dá)則使p65蛋白水平升高；p65下游CXCL1、CXCL2、CXCL8等趨化因子的mRNA和蛋白水平均受YTHDF1正向調(diào)控。

2. 免疫抑制閉環(huán)：CXCL1-CXCR2軸介導(dǎo)MDSCs募集，抑制CD8?T細(xì)胞：

① YTHDF1敲除可降低CXCL1分泌，減少MDSCs的體外遷移與體內(nèi)浸潤；過表達(dá)YTHDF1則相反。

② CXCR2抑制劑（SB225002）可逆轉(zhuǎn)YTHDF1過表達(dá)誘導(dǎo)的MDSC募集；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，CXCL1中和抗體或CXCR2抑制劑，能恢復(fù)YTHDF1過表達(dá)腫瘤中CD8?T細(xì)胞的浸潤與殺傷功能，抑制腫瘤生長。

③ 最終形成完整機(jī)制：YTHDF1→p65翻譯→NF-κB激活→CXCL1上調(diào)→CXCR2介導(dǎo)MDSCs募集→抑制CD8?T細(xì)胞。

（四）轉(zhuǎn)化價(jià)值：靶向YTHDF1聯(lián)合抗PD-1逆轉(zhuǎn)MSS耐藥，VNP遞送系統(tǒng)具臨床潛力

1. 聯(lián)合免疫治療增效，逆轉(zhuǎn)MSS耐藥：

① MSS型CT26模型中，抗PD-1單藥幾乎無效，而siYTHDF1+抗PD-1聯(lián)合治療顯著抑制腫瘤生長，延長小鼠生存期；MSI-H型MC38模型中，聯(lián)合治療進(jìn)一步增強(qiáng)抗PD-1單藥療效。

② 聯(lián)合組腫瘤內(nèi)CD8?T細(xì)胞、IFN-γ?CD8?T、GZMB?CD8?T細(xì)胞顯著增加，MDSCs、Treg細(xì)胞顯著減少；IFN-γ、TNF-α、IL-2等抗腫瘤細(xì)胞因子升高，IL-10、TGF-β等免疫抑制細(xì)胞因子降低。

2. 靶向遞送系統(tǒng)：VNP-siYTHDF1安全有效：

① 構(gòu)建減毒沙門氏菌VNP包裹siYTHDF1（VNP-siYTHDF1），可靶向腫瘤微環(huán)境實(shí)現(xiàn)YTHDF1特異性敲低。

② CT26模型中，VNP-siYTHDF1單獨(dú)使用即可顯著抑瘤，聯(lián)合抗PD-1效果好；該遞送系統(tǒng)能有效降低腫瘤內(nèi)YTHDF1、p65、CXCL1表達(dá)，增加CD8?T細(xì)胞浸潤、減少MDSCs。

③ 安全性評估顯示，VNP-siYTHDF1處理后小鼠體重?zé)o明顯下降，主要器官無明顯病理損傷，具備良好的臨床轉(zhuǎn)化安全性。

一句話總覽：YTHDF1高表達(dá)→通過m?A促進(jìn)p65翻譯→激活NF-κB→上調(diào)CXCL1→募集MDSCs→抑制CD8?T→形成免疫抑制微環(huán)境→MSS-CRC抗PD-1耐藥；靶向YTHDF1（尤其VNP-siYTHDF1）可逆轉(zhuǎn)MDSC介導(dǎo)的免疫抑制，與抗PD-1協(xié)同增效，顯著抑制CRC生長。 

研究意義

（一）理論意義

1. 明確YTHDF1是CRC免疫抑制的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因子，揭示了m?A表觀轉(zhuǎn)錄調(diào)控在腫瘤免疫微環(huán)境重塑中的新機(jī)制，完善了CRC免疫逃逸的分子網(wǎng)絡(luò)。

2. 闡明YTHDF1→m?A-p65→NF-κB-CXCL1→CXCR2-MDSCs的完整調(diào)控軸，為理解MSS型CRC免疫治療耐藥提供了全新的理論依據(jù)。

3. 證實(shí)YTHDF1可作為CRC預(yù)后評估與免疫治療療效預(yù)測的生物標(biāo)志物，為CRC患者的分層管理提供新靶點(diǎn)。

（二）臨床轉(zhuǎn)化意義

1. 提出靶向YTHDF1聯(lián)合抗PD-1的新型聯(lián)合治療策略，為解決MSS型CRC免疫治療原發(fā)耐藥這一臨床難題提供了有效方案。

2. 開發(fā)的VNP-siYTHDF1靶向遞送系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了YTHDF1在腫瘤微環(huán)境中的特異性敲低，兼具高效性與安全性，為YTHDF1靶向藥物的臨床轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。

3. 本研究的機(jī)制發(fā)現(xiàn)可拓展至其他MSS型實(shí)體瘤，為泛癌種免疫治療耐藥的逆轉(zhuǎn)提供了新思路。